登革熱IgG間接法檢測(cè)試劑盒
Panbio Dengue IgG Indirect ELISA
產(chǎn)品目錄號(hào)01PE30
預(yù)期用途
Panbio Dengue IgG Indirect ELISA用于定性檢測(cè)登革熱病原血清型（1、2、3和4）血清中的IgG抗體，輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)臨床癥狀或既往感染登革熱病毒的患者。
概述
蟲(chóng)媒病毒中的登革熱屬通過(guò)蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。 登革熱病毒感染，與傷寒病有關(guān)，其特征是突然發(fā)熱、劇烈頭痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛和皮疹。 登革熱感染的嚴(yán)重并發(fā)癥包括登革出血熱和登革休克綜合征。此類(lèi)并發(fā)癥的發(fā)病率增加與繼發(fā)性感染不同登革熱血清型有關(guān)。
通過(guò)ELISA對(duì)四種登革熱血清型的IgG類(lèi)特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，是一種診斷既往感染登革熱病毒的患者的重要方法。 配對(duì)血清中IgG， 水平不斷升高是活動(dòng)性登革熱感染的表現(xiàn)。傳統(tǒng)上，血凝抑制試驗(yàn)（HAI）滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當(dāng)前的界定方法是采用及時(shí)分離至少7天的配對(duì)血清標(biāo)本檢測(cè)，急性標(biāo)本的HAI滴度≥ 1:2560被認(rèn)為患者感染了繼發(fā)性黃病毒1。
檢測(cè)原理
血清中存在的登革熱病毒抗體，與微孔測(cè)試條上聚苯乙烯表面附著的登革熱抗原結(jié)合物相結(jié)合。 洗去剩余的血清并添加過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG抗體。清洗微孔，再添加無(wú)色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/*（TMB顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍(lán)。用酸終止反應(yīng)后，TMB變黃。顯色表示測(cè)試樣本中存在登革熱IgG抗體。
提供的材料
- 登革熱抗原（血清型1、2、3和4）包被微孔板-（12x8孔）。即用型。未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- 清洗緩沖液（20倍） - 1瓶，60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶，可在37℃孵育液體至澄清?；旌暇鶆?。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25℃儲(chǔ)存一周。
- 樣本稀釋劑 – 2瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- HRP標(biāo)記抗人IgG – 1瓶，15mL（綠色）。即用型。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗人IgG，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- TMB顯色液（TMB） - 1瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和*的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- 陽(yáng)性質(zhì)控品 – 1瓶，紅色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- 校準(zhǔn)品 – 1瓶，黃色瓶蓋，850μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- 陰性質(zhì)控品 – 1瓶，綠色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
- 終止液 – 1瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M磷酸。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-25℃可保持穩(wěn)定。
Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊(cè)商標(biāo)。
需要但未提供的材料
- 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL容積）
- 去離子水
- 標(biāo)板清洗系統(tǒng)
- 酶標(biāo)儀，含450nm濾波器
- 計(jì)時(shí)器
- 刻度量筒
- 燒瓶
- 試管或微滴定板，用于稀釋血清
注意事項(xiàng)
用于體外診斷
- 在制備質(zhì)控品的過(guò)程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過(guò)人類(lèi)免疫缺陷病毒1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測(cè)，結(jié)果為陰性。但是，任何測(cè)試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原包被微孔板都應(yīng)按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預(yù)防中心以及美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級(jí)2處理。
- 該測(cè)試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標(biāo)本基質(zhì)的方法。
- 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長(zhǎng)的血清。
- 不可加熱，否則血清將失去活性。
- 在開(kāi)始檢測(cè)前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測(cè)受溫度變化的影響。微孔板在達(dá)到室溫（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。
- 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導(dǎo)致污染。
- 未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
- 底物系統(tǒng)：
- 由于TMB易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。
- 避免長(zhǎng)時(shí)間陽(yáng)光直射。
- 有些清潔劑可干擾TMB的性能。
- TMB可能呈現(xiàn)淡藍(lán)色，這不影響底物的活性或測(cè)定結(jié)果。累積。
- 疊氮話鈉還抑制酶標(biāo)物的活性。在添加酶標(biāo)物時(shí)必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。
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